DNA 退火缓冲液（5×）

产品简介

  Annealing Buffer for DNA Oligos (5×)，即 DNA 寡核苷酸退火缓冲液，该退火缓冲液不 仅可以用于常规 DNA Oligos 的退火，而且特别适合于较难退火的构建 RNAi（siRNA 和 shRNA） 质粒的 DNA Oligos，可以有效避免 DNA Oligos 自身形成发夹结构，并且两条 Oligos 退火后可以直接和经酶切纯化的质粒连接。通常转化后可以得到大量的阳性克隆。

保存条件

  常温配送。一个月内，4 ºC 保存。-20 ºC 长期保存，至少1年有效。

注意事项

1. DNA 退火缓冲液（5×）只适合于 DNA Oligos 的退火，不能用于 RNA Oligos 的退火。

2. 本产品仅用于科学研究，不得用于临床诊 断和治 疗，不得用于食品和yao 品，不得存放于普通住宅内。

使用说明

1.将 Oligos 干*用双蒸水配制成 50 µM，融化 DNA 退火缓冲液（5×） ，混匀备用。

2.配置如下退火反应体系，混匀。

Nuclease-Free Water     40 µL    

DNA 退火缓冲液（5×）     20 µL    

DNA Oligo A (50 μM)     20 µL    

DNA Oligo B (50 μM)     20 µL    

总体积     100 µL   

3.退火方法一： 将退火反应体系置于 PCR 仪中， 设置反应条件： 95℃变性 2 min， -1℃/30s/cycle 缓慢降温至 25℃。 程序设置以 Bio-Rad 的 T100 为例为： 1. 95℃, 2:00; 2. 95℃, 0:30, -1℃ per cycle; 3. GOTO step 2,70X; 4. 4℃, ∞。

    对于易形成发卡结构的 Oligos 可以延长时间降温时间： 95℃变性 2 min， -1℃/90s/cycle 缓慢降温至25℃。 程序设置以 Bio-Rad 的 T100 为例为： 1. 95℃, 2:00; 2. 95℃, 1:30, -1℃ per cycle; 3. GOTO step 2,70X; 4. 4℃, ∞。

4.退火方法二： 将退火反应体系放于 95°C 水浴锅或金属浴， 持续 2 min，后将退火反应体系置于一杯 95°C的水中，让其自然冷却至室温。 若是易形成发卡结构的 Oligos，可以将95°C 水放于保温杯中开盖降温。
   Note： 缓慢降温对形成正确的结构是非常有帮助的，降温过快将导致错误结构的产生。

5.退火结束后可直接用于连接反应，也可以-20ºC 冻存备用。 若进行酶切等其它反应，更好用纯化试剂盒进行纯化，或者确保退火产物在反应体系中体积不超过 5%，以避免退火缓冲液对后续酶反应体系的干扰。

6.为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。