产品简介
*API,即4’,6-联脒-2-苯基吲哚二盐酸盐,4’,6-*iami*ino-2-phenylin*ole, *ihy*rochlori*e,也称*API *ihy*rochlori*e,分子式为C16H15N5&mi**ot;2HCl,分子量为350.25,CAS号28718-90-3。
*API是一种常用的可以穿透细胞膜的蓝色荧光核酸染料,和双链*NA结合后可以产生比自身强20多倍的荧光。和EB(ethi*ium bromi*e)相比,*API对双链*NA的染色灵敏度要高很多倍。*API的更大激发波长为340 nm,更大发射波长为488 nm;*API和双链*NA结合后,更大激发波长为358 nm,更大发射波长为461 nm。*API也可对RNA进行染色,染色机理是其可以选择性嵌入&l*quo;AU序列&r*quo;并发出荧光。相比*API-*s*NA (Ex/Em=358 nm/461 nm),*API-RNA具有较长的更大发射波长(500 nm),其荧光亮度仅有*API-*s*NA的20%。尽管*API不能通过活细胞膜,但可以通过提高浓度使之进入活细胞。
*API具有很高的光漂白承受水平,能用来检测酵母线粒体*NA,叶绿体*NA,病毒*NA,Microplasm *NA以及染色体*NA。*API典型的蓝色荧光特性使其非常普遍的搭配其他绿色、*色或红色荧光染料用于细胞生物学多色荧光标记技术,因此也常作为核酸和染色体的复染剂用于细胞凋亡检测、RNA原位杂交、直接或间接免疫检测等领域,其染色后可用荧光显微镜观察或流式细胞仪检测。
本产品为溶液,分为2种形式,浓度为5 mg/mL和即用型,即用型产品可直接用于固定细胞或组织的细胞核染色。5 mg/mL *API需稀释后使用。用于细胞核染色时,推荐的*API工作浓度为0.5-10 µg/mL。
保存条件
冰袋运输,-20&or*m;C避光保存,至少1年有效。
注意事项
1.*API对人体有一定刺激性,请注意适当防护。
2.荧光染料都存在淬灭的问题,建议染色后尽量当天完成检测。
3.为减缓荧光淬灭可以使用抗荧光淬灭封片液。
4.低浓度的*API不容易穿透细胞膜。
5.本产品仅用于科学研究,不得用于临床诊 断和治 疗,不得用于食品和yao 品,不得存放于普通住宅内。
6.为了您的安Quan和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
使用说明
对于固定的细胞或组织样品,固定后,适当洗涤去除固定剂。*API染色通常在其他染色的zui后进行。如果不需要进行其它染色,则直接进行*API染色。
1.配制工作液:用双蒸水或PBS稀释母液,配制成所需要的工作的浓度(0.5-10 μg/mL)。
2.对于贴壁细胞或组织切片:加入适量*API染色液,覆盖住样品即可。
对于悬浮细胞:至少加入样本体积3倍的染色液,混匀。
3.室温放置3-5 min。
4.吸除*API染色液,用TBST、PBS或生理盐水洗涤2-3次,每次3-5 min。
5.直接在荧光显微镜下观察或封片后荧光显微镜下观察。激发波长360 nm,发射波长460 nm。细胞发生凋亡时,会看到凋亡细胞的细胞核呈致密浓染,或呈碎块状致密浓染。